1. 适用范围与检测意义:本品适用于谷物、饲料、食用油、调料和发酵酒等物质中黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1简写为AFB1)的快速检测。黄曲霉毒素B1是目前已知的化学物质中致癌性很强的一种,对人和若干动物具有强烈的毒性,其毒性作用主要是对肝脏的损害。黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。
2. 测定原理:本品采用高度特异性抗体抗原反应及免疫层析分析技术,通过单克隆抗体竞争结合AFB1-BSA偶联物和样品中可能含有的AFB1的原理。试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的AFB1-BSA偶联物和被胶体金标记的抗AFB1单克隆抗体。检出限为5ng/ml。
3. 所用器皿:常量天平±0.1g;蒸发皿或烧杯;量筒;滴管;移液管;小型粉碎机;离心机等。
4. 样品制备:
4.1 谷物:任取5g以上有代表性样品并充分碎,准确称取2.0g均匀粉碎试样于配套离心管中,再准确加入4ml纯净水和4.0ml的乙酸乙酯,将瓶塞盖紧密封,充分振荡5min,离心得上清液,将上清液用吸管吸出2.0ml到蒸发皿或小玻璃杯中,用电吹风吹干上清液,再根据样品的种类用以下规定的稀释液量用铝箔袋内配套吸管反复冲洗,彻底溶解杯底所有的固体,此溶解液为样品提取液即检测液。考虑不同样品对黄曲霉毒素B1的最高含量要求,可参考下表用稀释液溶解杯底固体:
谷物残留限量(ppb) |
2.5 |
5 |
10 |
20 |
使用稀释液体积(ml) |
0.4 |
0.8 |
1.6 |
3.2 |
4.2 饲料(以残留限量50ppb计算):任取5g以上有代表性样品并充分粉碎,准确称取2.0g均匀粉碎试样于配套离心管中,再准确加入4ml纯净水和4.0ml的乙酸乙酯,将瓶塞盖紧密封,充分振荡5min,离心得上清液,将上清液用吸管出0.5ml到蒸发皿或小玻璃杯中,用电吹风吹干上清液,再用2ml的稀释液量用铝箔袋内配套吸管反复冲洗,彻底溶解杯底所有的固体,此溶解液为样品提取液即检测液。如果残留限量是30ppb,则用1.2ml的稀释液溶解;如果残留限量是40ppb,则用1.6ml的稀释液溶解。
4.3 食用油:称取2.0g油样于小烧杯中,用8ml正己烷分次将试样转移至分液漏斗中,准确加入4ml纯净水充分振荡3min,吸去上层正己烷层,再加入4ml的乙酸乙酯,将瓶塞盖紧密封,充分振荡5min,静置或离心得上清液,将上清液吸出2ml到小玻璃杯中,用电吹风吹干,再用稀释液溶解后为样品提取液。
4.4 酱油、醋、发酵酒:称取25.0g样品于小烧杯中,用5ml蒸馏水将试样转移到分液漏斗中,加入20ml三氯甲烷,加塞轻轻振摇3min,静置分层。放出下层三氯甲烷层,经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于蒸发皿中,再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中,重复振摇提取,三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中,最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器,洗液并于蒸发皿中,用电吹风吹干。吹干冷却后,准确加入稀释液,将蒸发皿中的凝结物充分溶解。